mercredi 1 juin 2016

Antioxydant cellulaire et ORAC

Potentiel antioxydant du Trolox contre le t-BuOOH et le AAPH
Ces deux tests permettent de détecter et de quantifier certaines propriétés antioxydantes des échantillons testés. Le test ORAC est un simple test chimique largement utilisé pour évaluer le potentiel antioxydant. Plus spécifiquement, il peut détecter les antioxydants capables d’éliminer les radicaux peroxyls, mais de par sa nature strictement chimique, ce test ne peut rendre état d’un potentiel dans un contexte cellulaire vivant. Le test sur cellules ne permet pas de discriminer les différents modes d’action des composés testés, mais est sensible à une plus large gamme d’antioxydant, comme par exemple les chélateurs de fer, indétectables par le test ORAC. De plus, le test cellulaire permet la détection de potentiel pro-oxydants qui ne sont pas non plus détectables par le test ORAC. Aussi, le test sur cellule peut renseigner sur la toxicité à court termes des composés testés en réalisant une quantification d’ADN par le Hoescht sur les cellules encore vivantes à la fin du test. Des fibroblastes cutanés sains ( WS-1  ) sont utilisés par défaut pour le test de potentiel antioxydant cellulaire, mais d'autres lignées cellulaires peuvent être utilisées au besoin selon le contexte d'étude.
Les deux tests de potentiel antioxydant se déroulent en microplaques et sont réalisés à l'aide du lecteur de plaque (Fluoroskan ). Les tests sur cellules sont réalisés en microplaques à 96 puits tandis que les tests ORAC sont réalisés en microplaques à 384 puits. Tous les tests antioxydants sont contrôlés en testant en parallèle une variété d’antioxydants connus, comme la quercetine, l’acide caféique, la catéchine, le Trolox, le deferoxamine ou d’autres au besoin. Le test sur cellules renvoie la concentration nécessaire à inhiber 50% de l’oxydation (IC50), tandis que le test ORAC renvoie un équivalent Trolox (µmol Trolox / mg d'échantillon testé).
Le dosage des phénols totaux est souvent réalisé en parallèle avec les tests de potentiel antioxydant lorsque les échantillons testés sont des extraits ou des mélanges complexes.

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